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PAXgene Blood RNA Kit

用于從PAXgene Blood RNA Tubes中穩(wěn)定的血液中分離和純化細(xì)胞內(nèi)RNA

• 用于體外診斷，使用PAXgene Blood RNA Tubes
• 用于收集，穩(wěn)定和凈化的集成系統(tǒng)
• RNA穩(wěn)定在18-25°C下長(zhǎng)達(dá)3天
• 在-20°C或-70°C下穩(wěn)定至少60個(gè)月
• 分析前的標(biāo)準(zhǔn)化樣品處理

      PAXgene Blood RNA系統(tǒng)由用于血液收集，穩(wěn)定和轉(zhuǎn)運(yùn)的PAXgene Blood RNA Tubes（可從BD獲得，目錄號(hào)762165）和用于基于硅膠膜的RNA分離和純化的PAXgene Blood RNA Kit組成。 可以使用微量離心機(jī)手動(dòng)進(jìn)行純化，或在QIAcube上自動(dòng)進(jìn)行純化。該系統(tǒng)已獲得FDA營(yíng)銷(xiāo)許可，并提供體外診斷用途的精確性能規(guī)格。

一、性能

      PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)RNA長(zhǎng)達(dá)3天（或在2-8°C下多5天）。目前可獲得的數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞RNA在-20°C或-70°C下穩(wěn)定至少60個(gè)月。

      使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA是高純度的，A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之間且≤1.0％（w / w）基因組DNA。當(dāng)使用多達(dá)30％的洗脫液時(shí)，至少95％的樣品在RT-PCR中沒(méi)有顯示出抑制作用。

      用PAXgene Blood RNA System和自動(dòng)化方案純化的RNA是高純度的，如缺乏RT-PCR抑制（見(jiàn)上文）和A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之間所示。通過(guò)β-肌動(dòng)蛋白基因序列的定量實(shí)時(shí)PCR測(cè)量，基因組DNA以≤1％（w / w）存在于≥95％的所有樣品中。

     使用PAXgene Blood RNA系統(tǒng)進(jìn)行RNA純化的自動(dòng)化方案提供了高度可重復(fù)和可重復(fù)的RT-PCR結(jié)果，使其對(duì)臨床診斷測(cè)試具有高度可靠性。

二、原理

      PAXgene Blood RNA Kit用于從PAXgene Blood RNA Tube中收集的2.5 ml人全血中純化總RNA。該過(guò)程很簡(jiǎn)單，可以使用手動(dòng)或自動(dòng)程序進(jìn)行。

      PAXgene Blood RNA Tubes含有基于RNA穩(wěn)定技術(shù)的試劑組合物（美國(guó)6,602,718和6,617,170）。該試劑組合物保護(hù)RNA分子免受RNase的降解，并使基因表達(dá)的離體變化小化。PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)RNA長(zhǎng)達(dá)3天或在2-8°C下多5天。目前可獲得的數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞RNA在-20℃或-70℃下穩(wěn)定至少60個(gè)月。

三、程序

      PAXgene Blood RNA程序很簡(jiǎn)單，可以使用手動(dòng)或自動(dòng)程序進(jìn)行

1、手動(dòng)PAXgene血液RNA程序

      純化開(kāi)始于離心步驟以在PAXgene Blood RNA Tube中沉淀核酸。將沉淀洗滌并重懸浮，并在優(yōu)化的緩沖液中與蛋白酶K一起孵育以產(chǎn)生蛋白質(zhì)消化。通過(guò)PAXgene Shredder旋轉(zhuǎn)柱進(jìn)行另外的離心以使細(xì)胞裂解物均質(zhì)化并除去殘留的細(xì)胞碎片，并將流出級(jí)分的上清液轉(zhuǎn)移到新的微量離心管中。加入乙醇以調(diào)節(jié)結(jié)合條件，并將裂解物應(yīng)用于PAXgene RNA旋轉(zhuǎn)柱。在短暫離心期間，當(dāng)污染物通過(guò)時(shí)，RNA選擇性地結(jié)合到PAXgene二氧化硅膜上。在幾個(gè)有效的洗滌步驟中除去剩余的污染物。在*和第二洗滌步驟之間，用DNase I處理膜以除去痕量的結(jié)合DNA。洗滌步驟后，將RNA在洗脫緩沖液中洗脫并加熱變性。 

2、自動(dòng)化PAXgene血液RNA程序

      在QIAcube上自動(dòng)化的樣品制備遵循與手動(dòng)程序相同的步驟，使您能夠繼續(xù)使用PAXgene Blood RNA Kit純化高質(zhì)量RNA。

      自動(dòng)RNA純化方案由2部分（或方案），“PAXgene Blood RNA Part A”和“PAXgene Blood RNA Part B”組成，兩部分之間有簡(jiǎn)短的人工干預(yù)。

      將離心，洗滌和重懸的核酸沉淀從PAXgene Blood RNA Tube轉(zhuǎn)移到處理管中，將其置于QIAcube工作臺(tái)上的熱振蕩器單元中。操作員從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part A”協(xié)議。QIAcube執(zhí)行協(xié)議的步驟，直至在洗脫緩沖液中洗脫RNA。操作人員將含有純化RNA的微量離心管轉(zhuǎn)移到QIAcube的熱水瓶單元中。操作員從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part B”協(xié)議，并通過(guò)QIAcube進(jìn)行熱變性。

      平均樣品制備時(shí)間（基于來(lái)自12個(gè)樣品制備的數(shù)據(jù)）為125分鐘，僅有約20分鐘的實(shí)際操作時(shí)間。

四、應(yīng)用

      當(dāng)該試劑盒與PAXgene Blood RNA Tubes一起使用時(shí)，該系統(tǒng)提供來(lái)自全血的細(xì)胞內(nèi)RNA用于分子診斷測(cè)試中使用的RT-PCR。

PAXgene Blood RNA Kit產(chǎn)品詳細(xì)信息

50個(gè)PAXgene旋轉(zhuǎn)柱，50個(gè)PAXgene粉碎機(jī)旋轉(zhuǎn)柱，加工管，無(wú)RNase DNase I，無(wú)RNase試劑和緩沖液。與PAXgene Blood RNA Tubes配合使用

  品牌                           貨號(hào)                                       名稱(chēng)                                     

Qiagen                       762164                      PAXgene Blood RNA Kit       

 BD                             762165                      PAXgene Blood RNA Tube 

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