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胚胎植入前診斷(PGD)的PicoPLEX法全基因組拷貝數(shù)變異檢測

更新時間:2018-05-18瀏覽:6230次

低深度全基因組測序已經(jīng)被引入用于植入前遺傳診斷(PGD)中的染色體拷貝數(shù)變異(CNA)檢測。CNA檢測前的單細胞全基因組擴增以PicoPLEX WGA試劑為佳。

 

植入前基因篩查和診斷(PGS,PGD)是第三代試管嬰兒技術(shù),指體外受精(IVF)過程中所做的胚胎或卵母細胞測試,以便選擇沒有染色體變異或帶有家族遺傳疾病等位基因的胚胎,提高懷孕成功率,降低特定遺傳病的傳遞風(fēng)險。微陣列比較基因組雜交(arrayCGH)是IVF機構(gòu)zui常用的PGS技術(shù)。

 

參考文獻

Springer電子書《分子生物學(xué)方法》:

Deleye L., De Coninck D., Deforce D., Van Nieuwerburgh F. (2018) Genome-Wide Copy Number Alteration Detection in Preimplantation Genetic Diagnosis. In: Head S., Ordoukhanian P., Salomon D. (eds) Next Generation Sequencing. Methods in Molecular Biology, vol 1712. Humana Press, New York, NY

 

 

低深度全基因組測序相比arrayCGH有更高的分辨率和信噪比

胚胎植入前遺傳診斷(PGD)染色體變異檢測的傳統(tǒng)方法是微陣列比較基因組雜交(arrayCGH),它的缺點是分辨率不高而且價格較高。

低深度的全基因組測序可以解決這些問題。

文獻報道低深度全基因組測序是PGD染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量異常檢測的較好替換方法,15例病人47個囊胚3Mb以上的大規(guī)模平行測序(MPS)數(shù)據(jù)顯示比基于arrayCGH的PGD更高的分辨率和信噪比。雖然基于MPS的胚胎篩查還沒有長期的臨床數(shù)據(jù)支持,但是已經(jīng)有一些健康寶寶的案例。

 

低深度全基因組測序需要進行單細胞全基因組擴增。

 

Picoplex/SurePlex是胚胎植入前遺傳診斷CNA檢測的全基因組擴增技術(shù)

試管嬰兒胚胎植入前的檢查使用胚胎第5天的4-7個滋養(yǎng)層活檢細胞。

這些細胞分析前需要對細胞內(nèi)的基因組DNA進行全基因組擴增(WGA)。

 

因為樣本的稀有(只有4-7個細胞),一般的WGA技術(shù)擴增后結(jié)果會有偏差。

需要根據(jù)應(yīng)用的不同(不同的遺傳多態(tài)類型)選擇不同的WGA方法:

染色體拷貝數(shù)異常(CNA)檢測使用Picoplex/SurePlex方法(Rubicon Genomics公司)較好,這一方法的CNA檢測一致性較高,分辨率有3 MB。

 

注:SurePlex和PicoPLEX的技術(shù)是一樣的,都是Rubicon Genomics公司的同一技術(shù)。

 

Picoplex/SurePlex法PGD流程

使用PicoPlex/SurePlex WGA試劑盒擴增細胞。

擴增DNA超聲波剪切到200bp。

Illumina測序文庫制備。

Illumina NextSeq500測序儀測序。

 

結(jié)果

4-6個囊胚細胞得到CNV數(shù)據(jù),zui高達3Mb。

 

產(chǎn)品

單細胞全基因組擴增試劑

PicoPLEX® WGA Kit單細胞全基因組擴增試劑盒

PicoPLEX WGA Kit被IVF行業(yè)供應(yīng)商如BlueGnome信賴并用于胚胎植入前遺傳學(xué)篩查和診斷(PGS/PGD)。

 

英文名稱:Rubicon PicoPLEX WGA Kit

中文名稱:單細胞全基因組擴增試劑盒

品牌:Rubicon Genomics

貨號:R30050或RB3050(TAKARA版)

用途:卵裂球和滋養(yǎng)外胚層細胞的植入前基因篩查(PGS)和需要單細胞擴增的循環(huán)腫瘤細胞(CTC)中的CNV檢測。

 

從單細胞中擴增DNA構(gòu)建高重復(fù)性的文庫現(xiàn)在成為可能!PicoPLEX WGA kit采用技術(shù),設(shè)計、優(yōu)化用于從單細胞中擴增單拷貝基因組DNA。便捷的單管操作流程減少了手動操作的失誤,縮短了獲得結(jié)果的時間并降低背景。PicoPLEX WGA Kit同樣也可用于6 pg至50 pg的純化gDNA,并兼容微陣列比較基因組雜交(array CGH)分析及PCR。

 

DNA超聲波打斷管

Covaris DNA打斷管 貨號:520045

 

Illumina測序文庫制備試劑

NEBNext Ultra II kit

 

Illumina NextSeq500上機測序試劑

 

華雅旗下紅榮微再主營醫(yī)療核酸保存文庫擴增等產(chǎn)品,授權(quán)代理(上海)Rubicon Genomics單細胞文庫擴增試劑。