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BioGems重組人胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白—細胞無血清培養(yǎng)添加

更新時間:2017-12-18瀏覽:3008次

BioGems無血清細胞培養(yǎng)添加物—轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素

 

白蛋白、胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白等是無血清培養(yǎng)體系中細胞生長所必須的因子。

Biogems的人重組轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素生物活性與天然蛋白相同,批間穩(wěn)定。這些蛋白由真核細胞重組表達,不含動物成分。質(zhì)控嚴格,zui大程度地降低了污染的風(fēng)險。

 

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選購背景

一 胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)中的作用

二 重組和提取的胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白的區(qū)別

三 胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)基中的使用濃度

 

一 胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)中的作用

 

胰島素在無血清培養(yǎng)基中的作用

 

無血清或低血清培養(yǎng)基中,胰島素為必加組分,這是由胰島素對細胞的重要作用決定的。

我們都知道,胰島素在體內(nèi)zui主要的功能是調(diào)節(jié)機體血糖水平。其實胰島素的作用非常

廣泛,包括調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)和脂肪的代謝,以及促進細胞生長等。

 

轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)基中的作用

 

轉(zhuǎn)鐵蛋白是通用的鐵轉(zhuǎn)運劑,其可通過幫助細胞調(diào)節(jié)對鐵的攝取量而維持細胞的穩(wěn)態(tài),

進而有利于細胞的生長和增殖。

 

牛血清中含有牛種屬的轉(zhuǎn)鐵蛋白,由于轉(zhuǎn)鐵蛋白的保守性,牛轉(zhuǎn)鐵蛋白可對人和動物

細胞起到很好地保護和支持作用,因此培養(yǎng)基中通常要加入牛血清從而組成*培養(yǎng)基。無

血清培養(yǎng)基為達到與含血清培養(yǎng)基相同或相似的細胞培養(yǎng)性能,其中也必須添加轉(zhuǎn)鐵蛋白,

以實現(xiàn)對細胞鐵離子平衡的調(diào)節(jié),以及對細胞生長和增殖的維持。

 

二 無血清培養(yǎng)基中應(yīng)該添加提取的胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白,還是重組的胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白?

 

人胰島素的來源有限,無法滿足臨床和科研的需求,因此人們通常從牛或豬的胰臟中提取獲得胰島素。

人血漿中轉(zhuǎn)鐵蛋白的含量豐富,約為 25mg/ml,占血漿總蛋白的 4%,而且轉(zhuǎn)鐵蛋白的種屬間交叉活性比較強,所以轉(zhuǎn)鐵蛋白多從人或牛的血漿中提取而得。

 

胰島素種屬間高度保守,豬和牛的胰島素與人的胰島素氨基酸序列上分別僅有 1 個和 3

個氨基酸的差異,所以豬和牛的胰島素*可以替代人的胰島素來進行科學(xué)實驗和臨床治療。然而,畢竟豬和牛的胰島素屬異種蛋白,進入人體后容易產(chǎn)生抗體,影響治療效果,并引起副反應(yīng)。所以,目前臨床上廣泛應(yīng)用的是重組人胰島素,即使用基因工程手段,將人的胰島素基因轉(zhuǎn)移到細菌或者酵母細胞中,然后利用發(fā)酵工藝,進行大規(guī)模的生產(chǎn),從而得到大量、高純度的人胰島素。

 

同樣的,提取的轉(zhuǎn)鐵蛋白具有安全性差和批間差大等缺陷。尤其是將提取的轉(zhuǎn)鐵蛋白添加于用于細胞治療的無血清培養(yǎng)基中時,可能會將人或動物的病原體(如瘋牛病病毒,克雅氏病毒和其它未知病原體)藉回輸人體的細胞而帶入人體,從而發(fā)生非預(yù)期的疾病。而重組的轉(zhuǎn)鐵蛋白,則可*避免人或動物病原體污染的可能性,因此更適合用于配制細胞治療用的無血清培養(yǎng)基。

 

三 胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)基中的使用濃度

 

胰島素

所培養(yǎng)的細胞不同,無血清培養(yǎng)基中所需的胰島素量也有所區(qū)別,一般在 1-10mg/L之間。

轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)基中的使用濃度

轉(zhuǎn)鐵蛋白

同樣的,細胞種類不同,對轉(zhuǎn)鐵蛋白的需求量也不同,下表謹供參考。具體的濃度還是要根據(jù)細胞的種類、狀態(tài)和想要實現(xiàn)的功能來通過實驗確定。

表 4:轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清細胞培養(yǎng)基中的添加濃度

 

 

原代細胞  

CHO(中國倉鼠卵巢細胞)

雜交瘤和 Vero 細胞

轉(zhuǎn)鐵蛋白工作濃度  

5 -100mg/L

 10 - 50mg/L

5mg - 20mg/L

 

資料來源:BioGems

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